肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanchedeserticola  Y. C. Ma或管花肉苁蓉Cistanchetubulosa (Schenk) Wight的干燥带鳞叶的肉质茎"。前者习称“软大芸”，为历史悠久的名贵道地药材，内蒙古阿拉善盟为其道地产区2]。本品具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效3]，《本草纲目》记载“此物补而不峻，故有从容之称”4，肉苁蓉中的“肉”体现了本品肥厚质润的性状特征，“苁蓉”表达了发挥功效的特点。肉苁蓉活性成分丰富，主要含有苯乙醇苷类[5]、环烯醚萜类、挥发性成分、生物碱、多糖、甜菜碱等成分0]，其中松果菊苷和毛蕊花糖苷属于苯乙醇苷类成分，是《中国药典》2015年版规定的指标成分，苯乙醇苷类具有补肾阳、神经保护等作用;多糖类具有提高免疫力、延缓衰老等作用;甜菜碱具有保肝、抗肿瘤的作用;半乳糖醇具有润肠通便的作用。肉苁蓉为濒危物种，自然资源长期匮乏，远远无法满足当前市场需求，自2010年起，内蒙古阿拉善盟左旗苏海图基地栽培肉苁蓉寄主植物梭梭200.10km?，并接种33.35 km? 肉苁蓉，有效缓解了市场的供需矛盾。由于本品活性成分复杂，功效主治较多，为了更客观揭示本品的道地品质特征，本研究拟以道地药材的临床疗效和本草学为基础，充分重视中药的药效物质基础和关键活性物质的确定，逐步建立与肉苁蓉药材的功能主治相关的整体质量评价体系。因此，本研究以阿拉善盟所产肉苁蓉为研究对象,基于春、秋2个采收期和5种功效成分松果菊苷、毛蕊花糖苷、半乳糖醇、甜菜碱、可溶性多糖以及浸出物量，进行较全面考察和分析，为进一步揭示肉苁蓉整体质量特征和道地性品质内涵提供数据支撑。

1 材料与仪器1.1 材料

样品于春季(2015-05) 和秋季(2015-10) 采集于内蒙古阿拉善左旗苏海图肉苁蓉种植基地，分别编号为1~3,接种3年，经天津中医药大学李天祥教授鉴定为列当科植物肉苁蓉Cistanchedeserticola Y. C. Ma。样品经流水洗净，去除泥沙，室内阴干，再于55 "C烘千至恒定质量，粉碎，过4号筛，备用。

1.2 仪器与试剂

美国Alltech 1500 系列高效液相色谱仪，配置B05型高压梯度泵、UV1000型全波段可编程紫外可见检测器、2000ES型蒸发光散射检测器、CSChromPlus色谱工作站; UV-610OPCS型紫外可见分光光度计, YHG-600-BS-II型远红外快速干燥箱; XMTD-4000 型二:列四孔智能水浴锅, KDM型调温电热套，R-1001N 旋转蒸发仪，FA2104电子天平;甲醇、乙腈(色谱纯)，移液枪，甲酸(色谱纯)，95%乙醇、无水乙醇(分析纯)，硫酸(分析纯)，蒽酮(分析纯)，娃哈哈纯净水;对照品松果菊苷(批号MUST14080710)、甜菜碱(批号MUST-14080710)、无水葡萄糖(批号MUST-14080710)，质量分数均大于98%; 对照品毛蕊花糖苷(批号PM0321SA14)、半乳糖醇(批号SS0905HA14) ，质量分数均大于98%。

2 方法

2.1 松果菊苷及毛蕊花糖苷的测定

2.1.1 对照品溶液的制备 依次精密称定松果菊苷和毛蕊花糖苷对照品2.2、0.12 mg，加入50%甲醇定容至10mL量瓶中，即得含0.22 mg/mL松果菊苷和0.012 mg/mL毛蕊花糖苷的混合对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备 取药材干燥粉末1.000g,精密称定，置于100mL棕色量瓶中，精密加入50%甲醇50mL,密塞,摇匀,称定质量，浸泡30 min后，超声40min(功率250W，频率35kHz),取出放凉，再称定质量，补质量，静置，取上清液，0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得松果菊苷、毛蕊花糖苷供试液。

2.1.3 色谱条件 色谱柱Agilent ZORBAX EclipsePlusC18柱;流动相甲醇(A) -0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱，0~15min,32%A;15~18min,32%~34%A;18~37min,34%A;37~40min;34%~32%A;40~50min,32%A;体积流量1mL/min;洗脱时间50min;检测波长334nm;进样量10uL。

2.2 半乳糖醇的测定

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称定半乳糖醇对照品3.9 mg，加入50%甲醇定容至10mL量瓶中，得含0.39mg/mL半乳糖醇的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备取药材干燥粉末 1.000g,精密称定,置于250mL三角瓶中，精密加入50%甲醇100mL,密塞，摇匀，称定质量，浸泡30 min后，超声40 min，取出放凉，转移定容至100 mL量瓶中，吸取0.4 mL供试液，稀释至25 mL棕色量瓶中，0.45 yum 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2.3 色谱条件 色谱柱Diamonsil Cg柱;流动相为乙腈-水(90: 10); 体积流量0.5 mL/min;蒸发光检测器;漂移管温度80 C;载气体积流量2.4 L/min;洗脱时间10 min;进样量5 pL。色谱图见图2。

2.3 甜菜碱的测定

2.3.1 对照品溶液的制备 精密称定甜菜碱对照品1.2mg, 加入80%甲醇定容至10mL量瓶中，即得质量浓度为0.12 mg/mL葡萄糖对照品溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备  取药材干燥粉末0.100g,精密称定,置于100mL三角瓶中，精密加入80%甲醇40mL,密塞，摇匀，称定质量，浸泡20 min后，超声30min, 取出放凉，补充质量，静置，取上清液，0.45 yum微孔滤膜滤过，取续滤液，即得甜菜碱供试品溶液。

2.3.3 色谱条件 色谱柱Venusil XBP NH2柱; 流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液(80 : 20);体积流量0.6 mL/min:蒸发光检测器:漂移管温度90 "C:载气体积流量2.2 L/min;洗脱时间15 min; 进样量10pL。色谱图见图3。

2.4 可溶性多糖的测定 

2.4.1 对照品溶液的制备 取无水葡萄糖对照品6.2 mg精密称定,加入蒸馏水定容至10mL量瓶中，即得含0.62 mg/mL葡萄糖对照品溶液。

2.4.2 供试品溶液的制备 取肉苁蓉药材干燥粉末1.000 g，精密称定，置于250mL圆底烧瓶中，向其加入95%Z醇50mL水浴回流2次，每次1h,滤过，弃去2次滤液，回收滤渣，滤渣加水50mL，回流2次，每次2h,滤过，合并2次滤液，活性炭脱色后转移定容至100 mL量瓶中，取1 mL溶液稀释至50 mL量瓶中即得多糖供试品溶液。

2.4.3 检测条件 取0.200g蒽酮，精密称定，浓硫酸定容至100 mL量瓶中，即得。取供试品溶液2mL, 加入至50mL具塞试管中，冰水浴中缓慢滴入5 mL硫酸蒽酮，摇匀，置于沸水浴中10 min,取出，冰水浴冷却后，以蒸馏水做空白对照，626 nm下测得吸光度(A)值，并根据A值计算多糖量。

W=(CX 50X 100)/样品质量X1000

W为多糖量，C为样品无水葡萄糖的质量浓度

2.5 浸出物的测定

取供试品4.000g，精密称定，置于250 mL锥形瓶中，精密加入稀乙醇(取529 mL无水乙醇，加水稀释至1000mL,即得49.5%~50.5%Z醇的溶液)100mL,密塞，冷浸，前6 h内振摇，再静置18h,用干燥过滤装置迅速滤过，取续滤液20 mL置于干燥至恒定质量的蒸发皿中，放于水浴锅上蒸干，蒸干后在放置于105 C的烘箱中干燥3 h,取出后静置于干燥器中冷却30 min,称定质量，以干燥品计算醇溶性浸出物量。

2.6 方法学考察

2.6.1 线性关系考察 精密量取松果菊苷、毛蕊花糖苷、半乳糖醇、甜菜碱、无水葡萄糖对照品各6份，按照一定比例稀释，配成系列对照品溶液，注入高效液相色谱仪及紫外可见分光光度计，测定，以峰面积或A值(Y)对质量浓度(X)作标准曲线，计算得到5种成分标准曲线，结果见表1。

2.6.2 精密度试验 精密吸取各对照品溶液适量，按上述各色谱条件重复6次，测定各自峰面积及A值，RSD分别为0.34%、0.58%、0.91%、1.16%、0.04%。结果表明仪器精密度良好。

2.6.3 重复性试验 精密称定1号(春)样品粉末1.000g各6份，分别按各供试品溶液制备项下制备供试品溶液，注入液相色谱仪，测定各自峰面积，可溶性多糖应用紫外可见分光光度法在626nm下测定A值,RSD分别为1.52%、1.88%、1.51%.0.40%、0.98%。结果表明方法重复性良好。

2.6.4 稳定性试验 精密吸取1号(春)样品各供试品溶液适量，注入液相色谱仪中，测定0、1. 2、3、4、5h下的峰面积，RSD分别为1.98%、1.69%、1.90%、2.27%，表明样品溶液在5h内稳定。可溶性多糖供试品溶液应用紫外可见分光光度法在626nm下测定A值，测定0、0.5、 1.0、1.5、2.0、2.5h下的A值，RSD为0.03%，表明样品溶液在2.5 h内稳定性良好。

2.6.5 加样回收率试验 精密称取样品6份，分别加入相应对照品即松果菊苷1.92 mg、毛蕊花糖苷0.14 mg、半乳糖醇0.29 mg、甜菜碱1.72 mg、无水葡萄糖1.50 mg,按各供试品溶液制备项下制备供试品溶液，注入液相色谱仪及紫外可见分光光度计中，测定各自回收率为98.59%、98.85%、102.19%、100.78%、99.10%，RSD为1.10%、1.16%、1.29%、0.46%、2.02%。结果表明方法可行。

2.7 样品测定

取不同来源的肉苁蓉样品，每批取3份样品，按各供试品溶液制备项下制备供试品溶液，再按各成分色谱条件项下进行指标成分的测定，重复测定3次，取其算术平均值。结果见表2。《中国药典》2015 年版规定肉苁蓉中指标成分松果菊苷及毛蕊花糖苷=者总量不得小于3.0 mg/g。由表2可知，春季、秋季采收样品二者总量均达到药典规定水平，且春季量较高，达12.21 mg/g, 是秋季样品的3倍多，为《中国药典》2015 年版规定量的4倍。基于松果菊苷，春季、秋季样品中的累积量相当，无显著性差异，表明春、秋季的药材中松果菊苷量波动不大，相当平稳。基于毛蕊花糖苷，春季样品显著高于秋季样品，约是秋季的30倍，表明毛蕊花糖苷累积量波动极大。根据相关文献报道，松果菊苷和毛蕊花糖苷含有量不仅在肉苁蓉属中不同种之间有明显差异，在同种的不同个体7和不同部位8的量差异也极其明显;基于甜菜碱，春季样品量显著高于秋季。由此可见，毛蕊花糖苷、甜菜碱这2种功效成分，春季出产药材成分量远远高于秋季。基于半乳糖醇，秋季样品量显著高于春季样品，丰富的半乳糖醇是本药材具有较强的润肠通便作用的物质基础!9]。基于可溶性多糖，春、秋季样品多糖量均处于较高量水平，尤其是秋季采集药材高达13.7%，同时，也为肉苁蓉具有较强提高人体免疫力和抗氧化(10-12]等作用提供了有力依据。基于浸出物，秋季样品量明显高于春季采收。

3 讨论

本研究是基于肉苁蓉补肾阳、提高免疫力、润肠通便及现代研究成果保肝等5大主要药效的功能物质，对道地产区出产的肉苁蓉中松果菊苷、毛蕊花糖苷、半乳糖醇、甜菜碱、可溶性多糖及浸出物进行定量考察，较全面地反映了道地产区栽培品肉苁蓉的内在质量。

3.1 肉苁蓉道地性内在品质特征及其对应的物质基础，并根据其品质特征，建议增加多糖作为评价其质量特征的指标成分，肉苁蓉是一味运用2000多年历史的道地药材，具有丰富的道地文化内涵。经典本草记载“以条粗壮，质柔润者为佳”的内在品质特征!I3]，而质硬，柴性者次。笔者曾在道地产区阿拉善盟肉苁蓉药材市场发现，当地认为质优价贵者称为“油苁蓉”。据文献报道[l4], 内蒙古，新疆南部、北部3地所产的肉苁蓉，总糖及多糖的量以内蒙古所产最高，且认为内蒙古所产者最优。本研究结果表明，肉苁蓉含有丰富的可溶性多糖和半乳糖醇，尤其秋季采收样品的量更高，分别达13.7%、19.5%，两者均为肉苁蓉的主要功效成分，丰富的肉苁蓉多糖和半乳糖醇是本品发挥临床疗效的物质基础，而二者的存在，与外观上呈现“油亮、体重、肥厚、质柔润、味甘”性状特征相吻合，这也进一步揭示了肉苁蓉药效成分与药材品质形成的内在联系。《中国药典》2015年版对药材质量进行严格规定和控制，有效保证临床用药的安全、有效。同时，针对具体中药材往往规定指标成分的限量，来控制其内在质量，但要求指标成分安全、有效、稳定、可靠。根据考察结果发现,春、秋季样品中肉苁蓉多糖量分别为10.46%、13.72%,在2个采收期之间相差仅仅约0.3倍，也就是说不同批次间多糖具有量高、波动小、个体间稳定性强、易控制的特点，并且半乳糖醇与其累积量有极强的相关性，因此建议将多糖作为肉苁蓉的指标成分之一，不但控制了调节免疫功能活性成分多糖的量，间接也反映润肠通便成分半乳糖醇的量，且能较全面地体现肉苁蓉的整体质量水平。

3.2 药典中收载的2种肉苁蓉差异较大，需建立更加客观的质控标准。《中国药典》2015 年版收载肉苁蓉和管花肉苁蓉两种药材，由于二者基原不同，在性状特征、成分量及主治作用方面存在差异性。因此，如何建立客观的质控标准比较困难。首先，基原不同，两者在性状特征上也不同。管花肉苁蓉药材质地坚硬，不易折断，断面呈颗粒状;而肉苁蓉质地特征与此恰恰相反，呈现体重、肥厚、质柔韧、易弯曲的性状特点。其次，两者在成分量上也存在差异。《中国药典》2015年版规定管花肉苁蓉和肉苁蓉中指标成分松果菊苷及毛蕊花糖苷二者总量分别是不得小于1.5%和0.3%，两者限量相差5倍。根据本研究结果和相关研究资料表明，肉苁蓉中的松果菊苷及毛蕊花糖苷二者量较低且不稳定，春、秋两季样品成分量相差约3倍，秋季样品量更低，总量为0.35%，仅达到《中国药典》2015年版规定水平，与秋季采收药材品质佳的理论及庞金虎等[15]研究的结果相悖，分析原因，由于秋季的产品多糖、半乳糖醇量大于春季，在干燥时间过长致使有效成分苯乙醇总苷类物质被体内相应的酶水解16]，有效成分大大降低["7，此外，笔者考察了2批质硬、体轻、色淡、柴性强(抽花序)的同一产地品相劣的春季采收药材，指标成分总量均值为1.06%，却远远高于秋季样品。彭芳等[18]考察了外观性状差异不显著的10株肉苁蓉，松果菊苷含有量在0.18%~1.58%,相差近8倍，同时还发现不同批次指纹图谱中的相似度相对较低[9)。由此可见，肉苁蓉中松果菊苷及毛蕊花糖苷二者总量，在不同季节、不同批次、个体样品间量波动较大、不稳定，甚至某些样品中毛蕊花糖苷量低时仅千分之几20,无法体现有效成分的量效规律及其内在品质。若以两者总量作为指标成分，无法准确反映本品的客观品质。因此，建议改为考察苯乙醇总苷的量较为合理。同时，本品含有丰富的甜菜碱，春季样品量高达6.7%，而在考察中发现管花肉苁蓉不含此成分。管花肉苁蓉含有较高的苯乙醇苷类成分,具有较强的补肾阳和神经保护作用。而肉苁蓉含有丰富多糖和半乳糖醇，具有较强的抗衰老和润肠通便之功效。由.上述可知，两者在基原、性状特征、成分量及主治作用方面存在差异性，需制定更加客观统一-的质控标准。

3.3  药典中对肉苁蓉含水量的规定，缺乏合理性，限制了其在市场上流通使用肉苁蓉习称“软苁蓉”，具有“肉厚而力紧”“质柔润者为佳”品质特征。本品长年生长在地下，为较典型肉质类药材。表2显示，秋季样品含极丰富的多糖和半乳糖醇，分别达13.7%、19.5%。由于植物多糖的羟基和其他极性基团存在，具有较强的亲水性，这使药材在外观上呈现“软、质柔润”性状特征。笔者初步统计了药典上收载常见的10个肉质类药材规定的含水限量，玉竹为16%，黄精为18%，天麻为15%，地黄为16%,玄参为16%，天冬为16%，麦冬为18%，龙眼肉为15%，党参为16%，当归为15%，在正常储存条件下，本品具有更强的吸湿性。因此，同为肉质类药材，仅把肉苁蓉含水限量规定为10%，显然不合理。建议本品含水限量为16%，比较客观、合理。此外，分析了2014年、2015 年采收的样品以及在市场上收集的药材，含水量均高于10%，为不合格药材。因此，由于含水限量规定过于低，明显限制了道地药材肉苁蓉在市场上流通和临床上推广使用。